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本教材以普通高等教育十一五*規(guī)劃教材《細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)》為基礎(chǔ)，融入工學(xué)結(jié)合的辦學(xué)思路，聘請企業(yè)一線專家參與教材建設(shè)，開發(fā)企業(yè)真正用得上的教學(xué)內(nèi)容，項(xiàng)目教學(xué)、行為引導(dǎo)式教學(xué)、任務(wù)驅(qū)動式教學(xué)等在教材中得到了充分體現(xiàn)。教材中的五個項(xiàng)目均取材于企業(yè)(或行業(yè))的真實(shí)工作任務(wù)，包括VERO細(xì)胞的傳代培養(yǎng)、雞胚成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)、CHO細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)、抗人血白蛋白雜交瘤細(xì)胞的制備、胡蘿卜細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)，設(shè)計了12個工作任務(wù)。每個項(xiàng)目都附有與之配套的實(shí)訓(xùn)音像資料（時長約1個小時）和學(xué)生工作手冊，為教材使用者的自主學(xué)習(xí)提供了方便。本教材適合高等職業(yè)院校生物技術(shù)相關(guān)專業(yè)使用，也可作為生物技術(shù)人員的參考書和培訓(xùn)教材。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)的重要組成部分，是生物學(xué)各研究領(lǐng)域的基本技術(shù)和技能，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物制藥等各個領(lǐng)域。目前，全國開設(shè)生物相關(guān)專業(yè)的高等職業(yè)院校共有200多所，絕大多數(shù)學(xué)校都開設(shè)細(xì)胞培養(yǎng)方面的課程，但有關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)方面的書籍或教材，還不是完全適宜高職院校的基于工作過程的教學(xué)改革需求。本教材以普通高等教育十一五國家級規(guī)劃教材《細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)》為基礎(chǔ)，融入工學(xué)結(jié)合的辦學(xué)思路，聘請企業(yè)一線專家參與教材建設(shè)，開發(fā)企業(yè)真正用得上的教學(xué)內(nèi)容，項(xiàng)目教學(xué)、行為引導(dǎo)式教學(xué)、任務(wù)驅(qū)動式教學(xué)等在教材中得到了充分體現(xiàn)。教材中的五個項(xiàng)目均取材于企業(yè)(或行業(yè))的真實(shí)工作任務(wù)，包括VERO細(xì)胞的傳代培養(yǎng)、雞胚成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)、CHO細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)、抗人血白蛋白雜交瘤細(xì)胞系的制備、胡蘿卜細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)，設(shè)計了12個工作任務(wù)。本教材采用富媒體教材編寫理念，將教材與多媒體資源庫相結(jié)合，每個項(xiàng)目都附有與之配套的實(shí)訓(xùn)音像資料（時長共約1個小時），讀者可以通過使用移動終端掃描與之對應(yīng)的二維碼，感受時效性較強(qiáng)的視頻案例等多媒體素材。另外本書每個項(xiàng)目還附有配套的學(xué)生工作手冊和免費(fèi)的教學(xué)課件，這些都為教材使用者的自主學(xué)習(xí)提供了方便。參與本書編寫的人員既有具備多年細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)教學(xué)經(jīng)驗(yàn)的教師，也有工作在細(xì)胞培養(yǎng)一線的企業(yè)技術(shù)人員。其中，邊亞娟、周珍輝、任平國等主要負(fù)責(zé)動物細(xì)胞培養(yǎng)概論、項(xiàng)目一和項(xiàng)目二的編寫工作；秦靜遠(yuǎn)、張乃群、金小花等主要負(fù)責(zé)植物細(xì)胞培養(yǎng)概論和項(xiàng)目五的編寫工作；馮暉、呂健龍等主要負(fù)責(zé)項(xiàng)目三的編寫工作；李恒思、唐業(yè)剛等主要負(fù)責(zé)項(xiàng)目四的編寫工作；其他編寫人員主要參與了實(shí)驗(yàn)視頻的拍攝工作。本書還配套有豐富的立體化教學(xué)資源，可從www.cipedu.com.cn免費(fèi)下載。本書在編寫與出版過程中，得到了化學(xué)工業(yè)出版社、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院與北京四環(huán)生物制藥有限公司等單位的大力支持。北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院的章靜波教授審閱了全部書稿，并對本書的構(gòu)架和內(nèi)容提出了許多建設(shè)性意見。北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞中心的劉玉琴教授和北京四環(huán)生物制藥有限公司的車間主任呂健龍以及黃岡職業(yè)技術(shù)學(xué)院段院生等在配套音像資料的拍攝上做了大量工作。在此，作者謹(jǐn)向化學(xué)工業(yè)出版社、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院和北京四環(huán)生物制藥有限公司等單位致以誠摯的感謝。由于作者的經(jīng)驗(yàn)和水平有限，書中難免會有疏漏與不足之處，敬請廣大讀者與同仁批評指正。編者2014年4月

第一部分動物細(xì)胞培養(yǎng)

動物細(xì)胞培養(yǎng)概述2

一、動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念及優(yōu)缺點(diǎn)2

二、動物細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)展史4

三、動物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用6

四、動物細(xì)胞培養(yǎng)工作的基本要求和工作方法8

【難點(diǎn)自測】9

項(xiàng)目一VERO細(xì)胞的傳代培養(yǎng)10

【項(xiàng)目介紹】10

一、項(xiàng)目背景10

二、學(xué)習(xí)目標(biāo)10

三、項(xiàng)目任務(wù)10

【項(xiàng)目實(shí)施】10

任務(wù)一VERO細(xì)胞培養(yǎng)前的準(zhǔn)備10

·必備知識11

一、培養(yǎng)細(xì)胞的生長條件11

二、動物細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備14

三、動物細(xì)胞培養(yǎng)用品18

四、動物細(xì)胞培養(yǎng)用液25

五、動物細(xì)胞培養(yǎng)常用的消毒和無菌處理方法31

·操作規(guī)程34

一、動物細(xì)胞培養(yǎng)常用設(shè)備的使用34

二、動物細(xì)胞培養(yǎng)用品的清洗、包裝和滅菌36

三、動物細(xì)胞培養(yǎng)用液的配制和無菌處理39

四、動物細(xì)胞培養(yǎng)的無菌操作41

任務(wù)二VERO細(xì)胞的傳代和觀察43

·必備知識43

一、動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)技術(shù)43

二、培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)45

三、培養(yǎng)細(xì)胞的觀察和檢測技術(shù)52

·操作規(guī)程58

一、VERO細(xì)胞的傳代培養(yǎng)58

二、VERO細(xì)胞的常規(guī)觀察59

任務(wù)三VERO細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇60

·必備知識60

一、細(xì)胞的凍存60

二、細(xì)胞的復(fù)蘇61

三、細(xì)胞活性檢查61

四、細(xì)胞計數(shù)62

· 操作規(guī)程63

一、VERO細(xì)胞的凍存63

二、VERO細(xì)胞的復(fù)蘇64

三、VERO細(xì)胞的活性檢查65

【項(xiàng)目拓展知識】66

一、動物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計與布局66

二、動物細(xì)胞培養(yǎng)的其他常用液67

三、培養(yǎng)細(xì)胞的運(yùn)輸和短期保存68

【項(xiàng)目難點(diǎn)自測】69

項(xiàng)目二雞胚成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)71

【項(xiàng)目介紹】71

一、項(xiàng)目背景71

二、學(xué)習(xí)目標(biāo)71

三、項(xiàng)目任務(wù)71

【項(xiàng)目實(shí)施】71

任務(wù)一組織塊法培養(yǎng)雞胚成纖維細(xì)胞71

·必備知識71

一、培養(yǎng)細(xì)胞的取材72

二、組織塊培養(yǎng)法73

·操作規(guī)程74

一、操作用品74

二、操作步驟75

任務(wù)二消化法培養(yǎng)雞胚成纖維細(xì)胞76

·必備知識76

一、組織材料的分離76

二、消化培養(yǎng)法77

·操作規(guī)程78

一、操作用品78

二、操作步驟78

【項(xiàng)目拓展知識】79

一、正常組織細(xì)胞的培養(yǎng)79

二、腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)82

【項(xiàng)目難點(diǎn)自測】85

項(xiàng)目三CHO細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)87

【項(xiàng)目介紹】87

一、項(xiàng)目背景87

二、學(xué)習(xí)目標(biāo)87

三、項(xiàng)目任務(wù)87

【項(xiàng)目實(shí)施】88

·必備知識88

一、動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)概述88

二、動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法89

三、動物細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器96

四、動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的操作方式100

·操作規(guī)程101

【項(xiàng)目拓展知識】105

一、植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的概念105

二、植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的應(yīng)用和工業(yè)前景105

三、植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)流程107

四、植物細(xì)胞的規(guī)�；囵B(yǎng)體系的建立107

五、植物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)方法109

六、植物細(xì)胞生物反應(yīng)器111

【項(xiàng)目難點(diǎn)自測】113

項(xiàng)目四抗人血白蛋白雜交瘤細(xì)胞系的制備115

【項(xiàng)目介紹】115

一、項(xiàng)目背景115

二、學(xué)習(xí)目標(biāo)115

三、項(xiàng)目任務(wù)115

【項(xiàng)目實(shí)施】115

任務(wù)一人血白蛋白免疫小鼠的準(zhǔn)備115

·必備知識115

一、單克隆抗體的概念115

二、雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的基本原理116

三、雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的主要過程116

四、動物免疫116

·操作規(guī)程117

一、操作用品117

二、操作步驟117

任務(wù)二骨髓瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞的融合118

·必備知識118

一、脾細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞及飼養(yǎng)細(xì)胞的制備118

二、細(xì)胞融合和雜交瘤細(xì)胞的篩選119

·操作規(guī)程121

一、操作用品121

二、操作步驟121

任務(wù)三抗人血白蛋白雜交瘤細(xì)胞的篩選124

·必備知識124

一、酶聯(lián)免疫吸附法124

二、雙向擴(kuò)散法124

·操作規(guī)程125

任務(wù)四抗人血白蛋白雜交瘤細(xì)胞的克隆培養(yǎng)126

·必備知識126

一、有限稀釋法127

二、軟瓊脂平板法127

三、顯微鏡操作法127

四、熒光激活分離法127

·操作規(guī)程128

【項(xiàng)目拓展知識】128

一、雜交瘤技術(shù)的誕生128

二、雜交瘤細(xì)胞株的凍存和復(fù)蘇129

三、單克隆抗體的大量制備與純化129

四、細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)130

【項(xiàng)目難點(diǎn)自測】132

第二部分植物細(xì)胞培養(yǎng)

植物細(xì)胞培養(yǎng)概述136

一、植物組織培養(yǎng)136

二、植物細(xì)胞培養(yǎng)137

三、植物組織細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展史138

四、植物組織細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用140

【難點(diǎn)自測】142

項(xiàng)目五胡蘿卜細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)144

【項(xiàng)目介紹】144

一、項(xiàng)目背景144

二、學(xué)習(xí)目標(biāo)144

三、項(xiàng)目任務(wù)144

【項(xiàng)目實(shí)施】145

任務(wù)一MS培養(yǎng)基的制備145

·必備知識145

一、植物細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室條件145

二、植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基150

·操作規(guī)程156

任務(wù)二胡蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)159

·必備知識159

一、外植體的選擇和預(yù)處理159

二、植物愈傷組織培養(yǎng)的形成過程161

三、植物愈傷組織培養(yǎng)的一般程序162

四、植物組織細(xì)胞培養(yǎng)的無菌操作163

·操作規(guī)程163

任務(wù)三胡蘿卜細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)164

·必備知識164

一、單細(xì)胞的分離164

二、懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的生長和測定166

三、懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的同步化167

四、植物細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境條件167

·操作規(guī)程169

【項(xiàng)目拓展知識】170

一、植物細(xì)胞的固定化培養(yǎng)170

二、植物單細(xì)胞培養(yǎng)172

【項(xiàng)目難點(diǎn)自測】174

附錄細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)常用術(shù)語中英文對照177

參考文獻(xiàn) 182

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