目錄
前言
第一章實(shí)驗室規(guī)章制度和實(shí)驗記錄、實(shí)驗報告1
一、實(shí)驗室規(guī)章制度1
二、實(shí)驗室安全及防護(hù)2
三、實(shí)驗記錄和實(shí)驗報告3
(一)實(shí)驗記錄3
(二)實(shí)驗報告3
四、生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗的繪圖要求、方法及實(shí)驗數(shù)據(jù)處理分析方法4
(一)實(shí)驗報告中的圖表4
(二)實(shí)驗數(shù)據(jù)的處理與分析6
第二章實(shí)驗室常用儀器設(shè)備、常用試劑及常用實(shí)驗技術(shù)9
一、實(shí)驗室常用玻璃儀器的介紹9
(一)常用玻璃儀器9
(二)常用玻璃儀器的洗滌10
二、常用試劑的配制、緩沖溶液與緩沖體系的介紹11
(一)常用試劑配制要點(diǎn)11
(二)實(shí)驗試劑的使用12
(三)溶液濃度12
(四)緩沖溶液12
三、離心技術(shù)14
(一)離心中常用概念14
(二)離心方法16
(三)離心機(jī)的構(gòu)造16
(四)離心機(jī)的分類17
(五)離心機(jī)使用注意事項17
四、分光光度技術(shù)17
(一)原理17
(二)分光光度計的基本結(jié)構(gòu)18
(三)分光光度計的應(yīng)用18
(四)分光光度計的常用類型18
(五)分光光度計的使用19
五、層析技術(shù)20
(一)層析原理20
(二)層析分類22
(三)主要的層析技術(shù)24
六、電泳技術(shù)32
(一)電泳的基本原理32
(二)影響電泳的因素32
(三)電泳的分類33
(四)常用的電泳技術(shù)34
七、PCR技術(shù)37
(一)PCR技術(shù)的基本原理37
(二)PCR技術(shù)操作要素38
(三)PCR技術(shù)所需儀器設(shè)備41
(四)各種PCR技術(shù)的變體42
八、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)42
(一)設(shè)施器材及培養(yǎng)基43
(二)細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)操作44
(三)細(xì)胞培養(yǎng)具體流程44
(四)注意事項46
(五)細(xì)胞培養(yǎng)方式47
(六)細(xì)胞培養(yǎng)存在的不足47
九、其他常規(guī)儀器設(shè)備的使用47
(一)移液器47
(二)酶標(biāo)儀49
(三)水浴鍋51
第三章實(shí)驗項目53
第一節(jié)基礎(chǔ)性實(shí)驗項目53
一、蛋白質(zhì)定量分析實(shí)驗53
實(shí)驗一考馬斯亮藍(lán)G-250法測定蛋白質(zhì)含量53
實(shí)驗二BCA法測定蛋白質(zhì)含量54
實(shí)驗三Folin-酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質(zhì)含量56
實(shí)驗四紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量58
二、層析分離純化實(shí)驗59
實(shí)驗五血清γ-球蛋白的分離純化與鑒定59
實(shí)驗六血清脂質(zhì)的薄層層析62
三、電泳實(shí)驗64
實(shí)驗七血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳及定量分析64
實(shí)驗八心、肝、腎組織乳酸脫氫酶同工酶的電泳分離66
實(shí)驗九聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白69
實(shí)驗十SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量75
四、酶學(xué)實(shí)驗78
實(shí)驗十一堿性磷酸酶的分離、純化與比活性測定78
實(shí)驗十二酶促反應(yīng)動力學(xué)實(shí)驗83
實(shí)驗十三MMP-2和MMP-9表達(dá)的明膠酶譜分析90
五、物質(zhì)代謝實(shí)驗92
實(shí)驗十四胰島素和腎上腺素對血糖濃度的影響92
實(shí)驗十五肝糖原的提取與鑒定97
六、分子生物學(xué)實(shí)驗99
實(shí)驗十六組織細(xì)胞基因組DNA的提取99
實(shí)驗十七質(zhì)粒DNA的提取、定量、電泳與酶切鑒定101
實(shí)驗十八核酸含量的測定105
實(shí)驗十九PCR擴(kuò)增目的基因109
實(shí)驗二十DNA瓊脂糖凝膠電泳及限制性內(nèi)切核酸酶酶譜分析112
第二節(jié)融合性實(shí)驗項目114
一、免疫生化技術(shù)114
實(shí)驗二十一凝集反應(yīng)114
實(shí)驗二十二沉淀反應(yīng)119
實(shí)驗二十三免疫擴(kuò)散和免疫電泳125
實(shí)驗二十四酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗131
實(shí)驗二十五免疫膠體金實(shí)驗135
二、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)整合實(shí)驗139
實(shí)驗二十六培養(yǎng)細(xì)胞或組織總RNA的提取及RT-PCR擴(kuò)增目的基因139
實(shí)驗二十七培養(yǎng)細(xì)胞綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染及熒光顯微鏡檢測表達(dá)效率146
實(shí)驗二十八蛋白質(zhì)印跡(Western blot)實(shí)驗150
第三節(jié)創(chuàng)新性實(shí)驗項目159
實(shí)驗二十九基因克隆與重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建159
實(shí)驗三十基因重組表達(dá)質(zhì)粒在原核細(xì)胞中的表達(dá)、純化與鑒定164
實(shí)驗三十一基因重組表達(dá)質(zhì)粒在真核細(xì)胞中的表達(dá)與檢測168
實(shí)驗三十二免疫酶組織(細(xì)胞)化學(xué)技術(shù)172
實(shí)驗三十三免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)175
參考文獻(xiàn)178