本書涵蓋了分子生物學(xué)常用實驗技術(shù),分子生物學(xué)相關(guān)的細胞、組織和動物實驗,分子生物學(xué)常用數(shù)據(jù)庫,分子生物學(xué)實驗的設(shè)計和統(tǒng)計方法。本書實用性強、均是作者親自做過、非常熟悉的操作,所涉及的內(nèi)容均為常用且成熟的實驗方法,側(cè)重于實驗的具體操作、注意事項及個人的體會,符合初學(xué)者的需要,也可為從事基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的人員提供幫助,書中每一章節(jié)都附有作者的聯(lián)系方式,若遇到相關(guān)問題可及時與作者交流。本書是研究生們不可多得的一本有價值參考書。
李燕,女,37歲,中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室副教授。中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會會員,中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會會員。獲評陜西省青年科技新星和原總后勤部優(yōu)秀青年科技人才扶持對象。享受陜西省三秦人才津貼和軍隊優(yōu)秀專業(yè)技術(shù)人才崗位津貼。從事醫(yī)學(xué)本科生和研究生教學(xué)工作14年。主編專著3部,參編教材5部。近年來發(fā)表SCI收錄科技論文27篇;發(fā)表教學(xué)論文6篇;主持國家自然科學(xué)基金3項;獲國家專利授權(quán)2項。
第一章 PCR技術(shù)
第一節(jié) RT-PCR
第二節(jié) 實時定量PCR
第二章 RNA干擾技術(shù)
第三章 MicroRNA研究方法
第四章 長鏈非編碼RNA研究方法
第一節(jié) 長鏈非編碼RNA概述
第二節(jié) RNA pull-down鑒定RNA-蛋白質(zhì)相互結(jié)合
第三節(jié) RNA免疫共沉淀技術(shù)
第五章 CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)
第一節(jié) SgRNA的設(shè)計及打靶效應(yīng)分析
第二節(jié) 受精卵注射CRISPR/Cas9系統(tǒng)制備基因編輯動物
第六章 重組DNA技術(shù)
第一節(jié) 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備
第二節(jié) 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化
第三節(jié) 質(zhì)粒提取
第四節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA
第五節(jié) 凝膠回收DNA
第六節(jié) 重組DNA的構(gòu)建
第七節(jié) 病毒載體介導(dǎo)的重組DNA技術(shù)
復(fù)制缺陷型腺病毒載體的包裝
慢病毒載體的包裝
第八節(jié) 目的蛋白的原核表達與分離純化
目的蛋白的原核誘導(dǎo)表達
目的蛋白的表達檢測
菌體的細胞破碎
鎳離子親和層析純化
DEAE陰離子交換層析
凝膠過濾層析
第七章 Western-blot技術(shù)
第一節(jié) 蛋白樣品制備
第二節(jié) 蛋白定量
第三節(jié) SDS-PAGE電泳
第四節(jié) 電轉(zhuǎn)移
第五節(jié) 酶免疫定位
第八章 蛋白相互作用篩選及驗證
第一節(jié) 酵母雙雜交系統(tǒng)篩選
第二節(jié) 免疫共沉淀
第三節(jié) Pull-down實驗
第九章 蛋白泛素化檢測
第十章 轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制研究
第一節(jié) 轉(zhuǎn)錄因子與靶基因相關(guān)性分析
第二節(jié) 靶基因的啟動子克隆
第三節(jié) 報告基因活性分析
第四節(jié) DNA-轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合分析
第五節(jié) ChIP-Seq技術(shù)
第十一章 核酸甲基化分析
第一節(jié) 基因組DNA提取
第二節(jié) DNA甲基化分析
第三節(jié) RNA甲基化分析
第十二章 基因表達譜芯片分析
第十三章 蛋白質(zhì)譜分析
第十四章 細胞代謝研究方法
第一節(jié) 基于Seahorse生物能量分析儀測定糖酵解和線粒體有氧代謝的方法
第二節(jié) 線粒體呼吸鏈復(fù)合體功能的測定
第十五章 相關(guān)細胞學(xué)技術(shù)
第一節(jié) 細胞凍存
第二節(jié) 細胞復(fù)蘇
第三節(jié) 細胞計數(shù)法測定生長曲線
第四節(jié) MTT法測定細胞增殖
第五節(jié) CCK-8法測定細胞增殖
第六節(jié) BrdU法測定細胞增殖
第七節(jié) 平板克隆形成實驗
第八節(jié) 軟瓊脂克隆形成實驗
第九節(jié) Transwell
第十節(jié) 劃痕實驗
第十一節(jié) 細胞周期的測定
第十二節(jié) 細胞凋亡檢測
第十三節(jié) 脂質(zhì)體介導(dǎo)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
第十四節(jié) 病毒感染
第十六章 相關(guān)組織學(xué)技術(shù)
第一節(jié) 動物組織取材和固定
第二節(jié) 臨床標本收集方法
第三節(jié) 免疫組織(細胞)化學(xué)
第四節(jié) 間接免疫熒光
第五節(jié) 原位雜交技術(shù)
第十七章 相關(guān)常用動物實驗
第一節(jié) 裸鼠移植瘤動物模型
第二節(jié) 小動物活體成像技術(shù)
第十八章 分子生物學(xué)常用數(shù)據(jù)庫
第一節(jié) 基因基本信息的獲取
第二節(jié) 基因表達調(diào)控分析
第三節(jié) 基因功能分析
第十九章 計算機模擬輔助小分子藥物設(shè)計
第一節(jié) 基于藥效團模型的虛擬篩選方法
第二節(jié) 基于分子對接的虛擬篩選
第三節(jié) 骨架遷越
第二十章 常用實驗設(shè)計和統(tǒng)計方法
第一節(jié) 完全隨機設(shè)計分組
第二節(jié) 樣本量估計軟件實現(xiàn)
第三節(jié) 實驗原始數(shù)據(jù)記錄及預(yù)處理
第四節(jié) 統(tǒng)計分析方法的選擇
第五節(jié) 學(xué)術(shù)論文設(shè)計方法描述