目錄Contents

第一章 基礎微生物學實驗技術
一、微生物學實驗室安全教育
二、實驗準備--玻璃器皿的洗滌、包扎和滅菌
三、培養(yǎng)基的配制與滅菌
實驗1細菌培養(yǎng)基的配制與滅菌
實驗2酵母菌及霉菌培養(yǎng)基的配制與滅菌
實驗3放線菌培養(yǎng)基的配制與滅菌
四、微生物接種技術
實驗4細菌的接種和培養(yǎng)
實驗5酵母和霉菌的接種與培養(yǎng)
五、微生物的制片染色及形態(tài)觀察
實驗6普通光學顯微鏡的結構和使用
實驗7細菌染色與形態(tài)觀察
實驗8放線菌的接種與形態(tài)觀察
實驗9酵母菌水浸片制備、形態(tài)觀察及死亡率的測定
實驗10霉菌的形態(tài)觀察
六、微生物的生長測定
實驗11酵母菌細胞大小的測定
實驗12酵母菌細胞計數(shù)和出芽率的測定
實驗13比濁法測定大腸桿菌的生長曲線
七、微生物鑒定技術
實驗14細菌的生理生化實驗
實驗15細菌的分子生物學鑒定
實驗16真菌的分子生物學鑒定
八、樣品中菌落總數(shù)和大腸菌群檢測
實驗17菌落總數(shù)的測定
實驗18大腸菌群計數(shù)
九、細菌的分離篩選和發(fā)酵性能實驗
實驗19產蛋白酶的枯草芽孢桿菌的分離
實驗20枯草芽孢桿菌產α-淀粉酶發(fā)酵實驗
實驗21乳酸細菌的乳酸發(fā)酵實驗

第二章 微生物遺傳育種實驗技術
實驗1紫外線誘變育種--繪制細胞存活率和突變率曲線
實驗2紫外線誘變育種--篩選蛋白酶高產菌株
實驗3枯草芽孢桿菌營養(yǎng)缺陷型遺傳標記的制作
實驗4細菌基因組DNA的提取
實驗5DNA濃度和純度的檢測
實驗6瓊脂糖凝膠電泳實驗
實驗7聚合酶鏈反應（PCR）
實驗8堿變性法提取大腸桿菌質粒DNA
實驗9大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及質粒轉化
實驗10DNA的限制性酶切反應
實驗11重組質粒的構建、篩選及鑒定
實驗12畢赤酵母感受態(tài)的制備及其轉化實驗
實驗13大腸桿菌半乳糖基因高頻轉導

第三章 應用微生物學實驗技術
第一節(jié)顯微技術
一、暗視野顯微鏡的使用
實驗1暗視野顯微鏡使用舉例--細菌運動的觀察
二、相差顯微鏡的使用
實驗2相差顯微鏡使用舉例--釀酒酵母細胞內部結構的觀察
三、熒光顯微鏡的使用
實驗3熒光顯微鏡使用舉例--抗酸細菌的觀察
四、透射電子顯微鏡
實驗4大腸桿菌透射電鏡樣品的制備與觀察
五、掃描電子顯微鏡
實驗5大腸桿菌掃描電鏡樣品的制備與觀察
第二節(jié)除菌技術
一、物理除菌方法
二、化學除菌方法
三、各類培養(yǎng)基常采用的滅菌方法及注意事項
四、無菌操作環(huán)境的消毒與滅菌
第三節(jié)微生物培養(yǎng)技術
一、微生物培養(yǎng)技術
實驗6中高溫大曲制作實驗
實驗7厭氧袋法培養(yǎng)丙酮丁醇梭狀芽孢桿菌
實驗8厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)丙酮丁醇梭狀芽孢桿菌
二、同步培養(yǎng)技術
實驗9選擇法獲得同步生長酵母細胞的實驗技術
實驗10誘導法獲得霉菌分生孢子同步生長的實驗技術
三、透析培養(yǎng)技術
實驗11乳酸桿菌與酵母菌的透析培養(yǎng)
四、高密度培養(yǎng)技術
實驗12產乳球菌素的乳酸乳球菌的膜過濾培養(yǎng)
實驗13簡單節(jié)桿菌固定化轉化醋酸可的松實驗
五、原位分離培養(yǎng)技術
實驗14釀酒酵母酒精發(fā)酵的原位分離培養(yǎng)技術
六、補料分批培養(yǎng)技術
實驗15產桿菌肽地衣芽孢桿菌的補料分批培養(yǎng)
七、固態(tài)發(fā)酵技術
實驗16植酸酶的固態(tài)發(fā)酵
第四節(jié)染色技術及微生物細胞結構觀察
一、微生物細胞染色與觀察
實驗17酵母的負染色法
實驗18真菌的熒光染色與觀察
實驗19細菌的抗酸性染色法
二、微生物細胞染色與觀察
實驗20細菌莢膜的染色與觀察
實驗21細菌鞭毛的染色與觀察
實驗22細菌芽孢的染色
第五節(jié)微生物生長控制
一、生物量測定
二、生長曲線測定
實驗23平板計數(shù)法測定釀酒酵母的生長曲線
實驗24菌絲重量法測定絲狀真菌的生長曲線
實驗25核酸測定法繪制細菌的生長曲線
三、微生物生長代謝影響因素測定
實驗26營養(yǎng)因素對微生物生長的影響
實驗27接種量對微生物生長的影響
實驗28種齡對微生物生長的影響
實驗29溫度對微生物生長和代謝的影響
實驗30pH對微生物生長的影響
實驗31溶解氧對微生物生長的影響
實驗32滲透壓對微生物生長和代謝的影響
實驗33表面活性劑對微生物生長和代謝的影響
第六節(jié)微生物純種分離技術
一、純種分離技術和方法
二、細菌的分離
實驗34酸乳制品中乳酸菌的分離
實驗35產脂肪酶細菌的分離
實驗36產淀粉酶細菌的分離
實驗37醋酸菌的分離
實驗38固氮菌的分離
實驗39嗜鹽菌的分離
實驗40硝化細菌的分離
實驗41反硝化細菌的分離
實驗42谷氨酸產生菌的分離
實驗43雙歧桿菌的分離
三、放線菌的分離
實驗44彈土分離法分離金色鏈霉菌
實驗45諾卡氏菌的分離
實驗46植物內生放線菌的選擇性分離
四、酵母菌的分離
實驗47酒曲中酵母菌的分離
實驗48耐雙乙酰啤酒酵母菌的分離
實驗49耐二氧化硫葡萄酒酵母菌的分離
實驗50果汁中水解檸檬酸的酵母菌的分離
五、霉菌的分離
實驗51產蛋白酶毛霉的分離
實驗52甜酒曲中根霉菌的分離
實驗53產檸檬酸黑曲霉的分離
實驗54產右旋糖酐酶青霉的分離和培養(yǎng)
六、噬菌體的分離
實驗55大腸桿菌噬菌體的分離與純化
第七節(jié)微生物分類鑒定
一、細菌的分類鑒定
實驗5616S rDNA序列分析和進化樹構建
實驗57細菌全基因組測序
實驗58利用微生物快速測定儀對細菌進行分類
實驗59淀粉水解試驗
實驗60氧化酶試驗
實驗61過氧化氫酶試驗
實驗62酪蛋白分解試驗
實驗63β-半乳糖苷酶試驗
實驗64含碳化合物的利用試驗
實驗65丙二酸鹽試驗
實驗66葡萄糖銨試驗
實驗67動力試驗
實驗68耐鹽試驗
實驗69TTC試驗
二、酵母菌和霉菌的分類鑒定
實驗70真核微生物18S rRNA/ITS序列的分離及測序分析
實驗71利用微生物快速測定儀對真菌進行分類
實驗72分解脂肪試驗
實驗73類淀粉化合物形成試驗
實驗74尿素分解試驗
實驗75楊梅苷分解試驗
第八節(jié)微生物傳統(tǒng)誘變育種
一、概述
二、突變菌株的分離
實驗76大腸桿菌鏈霉素抗性標記制作
實驗77反饋抑制調節(jié)突變型賴氨酸高產菌株篩選
實驗78反饋抑制調節(jié)突變型卡那霉素高產菌株的選育
實驗79釀酒酵母呼吸缺失突變株的篩選
實驗80醬油曲霉溫度敏感型突變株的篩選
第九節(jié)微生物現(xiàn)代育種
一、概述
二、生物信息數(shù)據(jù)庫與查詢
三、基因工程基本操作
實驗81酵母菌DNA的提取及檢測
實驗82絲狀真菌總RNA的提取及檢測
實驗83RT-PCR獲得真核生物的目的基因
實驗84原核表達載體構建及在宿主中表達
實驗85真核表達載體構建及在宿主中表達
實驗86微生物cDNA文庫構建技術
實驗87PCR定點突變技術改造微生物菌種
四、細菌的轉化
實驗88枯草桿菌染色體DNA的轉化
五、細菌的轉導
實驗89枯草桿菌噬菌體的普遍轉導
六、細菌的接合
實驗90大腸桿菌的接合
實驗91絲狀真菌的轉化技術
七、原生質體融合技術
實驗92細菌原生質體細胞融合
實驗93酵母原生質體細胞融合
實驗94應用原生質體細胞融合技術選育醬油曲霉
實驗95電誘導酵母與短梗霉屬屬間融合
八、微生物基因組洗牌育種技術
實驗96釀酒酵母的基因組洗牌育種
第十節(jié)食品衛(wèi)生微生物學檢測
實驗97沙門氏菌檢驗
實驗98志賀氏菌檢驗
實驗99致瀉大腸埃希氏菌的檢驗
實驗100副溶血性弧菌檢驗
實驗101小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗
實驗102金黃色葡萄球菌檢驗
實驗103β-溶血性鏈球菌檢驗
實驗104肉毒梭菌及肉毒毒素的檢驗
第十一節(jié)微生物菌種保藏
一、普通菌種保藏方法
實驗105普通菌種保藏實驗
二、特殊菌種保藏方法
實驗106噬菌體和厭氧菌的保藏

附錄
附錄Ⅰ試劑
附錄Ⅱ培養(yǎng)基

參考文獻