本書在第四版的基礎(chǔ)上,補充更新了實驗,并整合成八章。第一章詳細介紹了顯微鏡技術(shù),第二章到第七章涵蓋了細胞器的形態(tài)與結(jié)構(gòu),酵母、線蟲、果蠅以及動物細胞的各種實驗系統(tǒng),第八章立足于全書實驗的總結(jié)和對學(xué)生綜合創(chuàng)新能力的培養(yǎng),提出了綜合實驗的設(shè)計原則和指導(dǎo)思想,并嘗試給出了四個綜合實驗的例子。本書各章均有實驗?zāi)康摹嶒炘�、結(jié)果分析以及思考題等,并在每一章的后面增加了參考文獻。
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本科畢業(yè)于北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,博士畢業(yè)于耶魯大學(xué)分子、細胞及發(fā)育生物學(xué)系。
目錄
第五版前言
第一章 基礎(chǔ)細胞生物學(xué)實驗1
實驗1.1 細胞膜的滲透性1
實驗1.2 細胞的凝集反應(yīng)3
實驗1.3 花粉粒活性染色鑒定5
實驗1.4 葉綠體和細胞核的密度梯度分離7
實驗1.5 細胞器的超活染色觀察9
實驗1.6 植物細胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察11
實驗1.7 果蠅誘捕和巨大染色體的觀察13
實驗1.8 孚爾根染色法14
實驗1.9 血涂片的制備與顯微觀察16
實驗1.10 植物原生質(zhì)體的制備及瞬時轉(zhuǎn)化17
實驗1.11 植物細胞質(zhì)膜的分離和純化技術(shù)19
實驗1.12 質(zhì)膜蛋白分選的膜泡運輸觀察20
實驗1.13 植物細胞程序性死亡的誘導(dǎo)和梯狀DNA的觀察23
第二章 高級細胞生物學(xué)實驗26
實驗2.1 氯化汞對水通道蛋白的抑制效應(yīng)觀察26
實驗2.2 核酸(DNA和RNA)的細胞核定位觀察28
實驗2.3 微絲骨架的特異性標記30
實驗2.4 微管骨架的熒光顯微標記實驗32
實驗2.5 線粒體的特異性熒光標記觀察34
實驗2.6 GFP-tubulin轉(zhuǎn)基因擬南芥的無菌培養(yǎng)及觀察35
實驗2.7 流式細胞儀觀察細胞周期37
實驗2.8 植物細胞胞吞作用及內(nèi)膜系統(tǒng)的熒光顯微鏡觀察39
實驗2.9 Taq酶的提取、分離純化及酶制劑的制備42
實驗2.10 木瓜蛋白酶的提取、活性測定及固定化44
實驗2.11 酵母雙雜交實驗47
實驗2.12 酵母單雜交實驗49
實驗2.13 凝膠阻滯實驗51
實驗2.14 雙分子熒光互補技術(shù)55
第三章 植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)及檢測59
實驗3.1 多肉植物的無菌培養(yǎng)59
實驗3.2 小麥成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)60
實驗3.3 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草葉盤法遺傳轉(zhuǎn)化61
實驗3.4 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化64
實驗3.5 發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆毛狀根轉(zhuǎn)化65
實驗3.6 基因組DNA的提取67
實驗3.7 植物組織總RNA的提取68
實驗3.8 核酸濃度和純度檢測71
實驗3.9 逆轉(zhuǎn)錄PCR實驗74
實驗3.10 real-time PCR實驗76
實驗3.11 Southern印跡雜交實驗78
實驗3.12 螢光素酶報告基因的檢測82
第四章 線蟲的實驗操作84
實驗4.1 線蟲DNA的提取84
實驗4.2 線蟲同步化85
實驗4.3 線蟲總RNA提取86
實驗4.4 線蟲的甲基磺酸乙酯(EMS)誘變87
實驗4.5 線蟲的雜交88
實驗4.6 線蟲基因型的鑒定89
實驗4.7 線蟲轉(zhuǎn)基因及整合90
實驗4.8 線蟲的RNAi實驗91
實驗4.9 利用CRISPR/Cas9對線蟲的基因組進行編輯92
第五章 果蠅的實驗操作94
實驗5.1 果蠅中腸干細胞的形態(tài)與觀察94
實驗5.2 果蠅S2細胞的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染96
實驗5.3 果蠅基因組DNA的提取99
實驗5.4 果蠅腸道損傷檢測(藍精靈法)101
實驗5.5 果蠅精巢免疫熒光染色102
實驗5.6 果蠅凋亡檢測(TUNEL法)105
實驗5.7 果蠅幼蟲脂滴的標記觀察108
第六章 動物細胞的實驗操作110
實驗6.1 HeLa細胞的傳代培養(yǎng)110
實驗6.2 脂質(zhì)體介導(dǎo)的外源基因轉(zhuǎn)染HeLa細胞111
實驗6.3 HeLa細胞有絲分裂的形態(tài)觀察113
實驗6.4 免疫共沉淀技術(shù)114
實驗6.5 DNA損傷誘發(fā)的焦點形成檢測116
實驗6.6 中性彗星實驗117
實驗6.7 細胞核質(zhì)分離提取技術(shù)119
第七章 細胞生物學(xué)綜合探究實驗122
實驗7.1 植物促生性芽孢桿菌緩解水稻受土壤鎘脅迫的作用123
實驗7.2 植物“類神經(jīng)系統(tǒng)”傳遞傷害信號的探索研究129
實驗7.3 哺乳動物細胞中非經(jīng)典的DSB末端修切途徑探索135
實驗7.4 跳舞草應(yīng)對環(huán)境刺激產(chǎn)生節(jié)律性運動規(guī)律的研究141
主要參考文獻147
附錄150