生物化學實驗分九章共63個實驗項目,包括糖類物質(zhì)的檢測與分析、脂類物質(zhì)的檢測與分析、氨基酸的檢測與分析、蛋白質(zhì)的分離制備與分析、酶的分離制備與分析、維生素的檢測分析、核酸的分離與分析、綜合性與設(shè)計性實驗等常用生物化學實驗內(nèi)容。另外還介紹了生物化學實驗的基本知識與基本操作,并在最后附上生物化學實驗中常用參數(shù),供實驗中參考。
生命科學在20世紀有了驚人的發(fā)展,并已經(jīng)成為當今世界三大發(fā)展最快的現(xiàn)代科學之一。生物化學是生命科學領(lǐng)域中的重要組成部分,也是較為活躍的學科之一。作為一門以實驗為基礎(chǔ)的學科,生物化學實驗方法和研究技術(shù)成為推動生物化學發(fā)展的重要動力。加強與提高生物化學實驗技術(shù)的研究與教學,對生物化學課程的學習具有重要作用。與傳統(tǒng)生物化學實驗內(nèi)容相比,當今生物化學研究更多地涉及生命現(xiàn)象的本質(zhì)與化學基礎(chǔ),并廣泛探討生物分子結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系、信息傳遞過程及基因表達調(diào)控的規(guī)律等,這使得現(xiàn)代生物化學實驗研究與教學在內(nèi)容上更加深入,更加廣泛。
為了適應(yīng)學科的發(fā)展及 “十二五”期間我國高等教育改革的需要,充分體現(xiàn)學科發(fā)展狀況,體現(xiàn)素質(zhì)教育、創(chuàng)新教育及個性教育的思想,圍繞“培養(yǎng)高素質(zhì)、寬口徑人才”的目標,提高教學水平和教學質(zhì)量,并結(jié)合近年來生物化學實驗技術(shù)和方法的發(fā)展及實驗室條件,在華中科技大學出版社的協(xié)調(diào)與組織下,相關(guān)院校共同編寫了適合普通院校使用的生物化學實驗教材,以適應(yīng)當今生物化學學科發(fā)展的需要。
本書適合作為普通高等院校各類理工科專業(yè)的生物化學實驗課教材或參考書。
本書由劉志國主編。參加本書編寫的有:武漢輕工大學劉志國、劉軍、閻達中,青島科技大學于建生、劉杰、李紅芳,湖北工業(yè)大學陳雄、王金華、吳正奇,武漢生物工程學院廖貴芹,陜西科技大學李敏康、宋宏新,大連工業(yè)大學金朝霞,陜西理工學院田光輝,西華大學車振明、李明元,信陽農(nóng)林學院王欣、趙麗萍、張耀州。武漢輕工大學生物技術(shù)教研室的其他老師(丁洪波、曾萬勇、呂玲肖等)也參加了部分校訂工作。華中科技大學出版社對本書的編寫給予了大力支持與幫助,在此表示衷心的感謝。
目錄
第一章實驗基本知識與基本操作(1)
第一節(jié)生物化學實驗室規(guī)則(1)
第二節(jié)實驗室安全和防護知識(2)
第三節(jié)基礎(chǔ)實驗操作技能(6)
第三節(jié)實驗誤差與提高實驗準確度的方法(39)
第四節(jié)實驗記錄與實驗報告(44)
第二章糖類物質(zhì)的檢測與分析(48)
第一節(jié)糖的呈色反應(yīng)和還原糖的檢驗(48)
第二節(jié)苯酚?硫酸法測定總糖濃度(50)
第三節(jié)還原糖的測定——3,5?二硝基水楊酸比色法(52)
第四節(jié)粗淀粉的測定——1%鹽酸旋光法(54)
第五節(jié)血糖的測定(57)
Ⅰ磷鉬酸比色法(57)
Ⅱ蒽酮比色法(59)
Ⅲ葡萄糖氧化酶?過氧化物酶法(GOD?POD法)(61)
第六節(jié)糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定(63)
第七節(jié)可溶性糖的硅膠G薄層層析(65)
第三章脂類物質(zhì)的檢測與分析(68)
第一節(jié)粗脂肪含量的測定——索氏抽提法(68)
第二節(jié)脂肪酸值的測定——堿滴定法(69)
第三節(jié)油脂皂化與皂化值的測定(72)
第四節(jié)碘價的測定(Hanus法)(73)
第五節(jié)血清膽固醇的測定(75)
Ⅰ化學比色法(75)
Ⅱ酶法(76)
第六節(jié)卵磷脂的提取與鑒定(78)
第七節(jié)脂肪酸的β?氧化(80)
第四章氨基酸的檢測與分析(83)
第一節(jié)紙層析法分離鑒定氨基酸(83)
第二節(jié)甲醛滴定法測定氨基氮含量(85)
第三節(jié)瓦氏呼吸儀法測定L?谷氨酸的含量(87)
第五章蛋白質(zhì)的分離制備與分析(91)
第一節(jié)蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)與等電點的測定(91)
第二節(jié)蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)、顏色反應(yīng)及電荷的測定(93)
第三節(jié)蛋白質(zhì)含量測定(一)——微量凱氏定氮法(97)
第四節(jié)蛋白質(zhì)含量測定(二)(101)
Ⅰ雙縮脲法(101)
Ⅱ考馬斯亮藍G?250法(Bradford法)(104)
ⅢFolin試劑法(106)
BCA法(108)
Ⅴ紫外(UV)吸收測定法(109)
第五節(jié)酪蛋白的制備(112)
第六節(jié)凝膠層析法分離蛋白質(zhì)(113)
第七節(jié)血紅蛋白的凝膠過濾(115)
第八節(jié)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的測定SDS?聚丙烯酰胺凝膠電泳法(118)
第九節(jié)血清蛋白質(zhì)乙酸纖維薄膜電泳(126)
第六章酶的分離制備與分析(130)
第一節(jié)酶的特性——底物專一性(130)
第二節(jié)pH值對酶活性的影響(132)
實驗三溫度對酶活性的影響(133)
第四節(jié)脲酶米氏常數(shù)的測定(135)
第五節(jié)糖化型淀粉酶活力的測定(138)
第六節(jié)脂肪酶活性測定(140)
第七節(jié)乳酸脫氫酶活力的測定(142)
第八節(jié)大麥萌發(fā)前后淀粉酶活力的測定(144)
第九節(jié)發(fā)色底物測定大曲中α?1,4?葡萄糖苷酶活力(147)
第七章維生素的檢測分析(150)
第一節(jié)維生素B1的熒光測定(150)
第二節(jié)維生素B2的測定(152)
第三節(jié)植物中抗壞血酸含量的測定(155)
第四節(jié)維生素A的測定(156)
第八章核酸的分離與分析(160)
第一節(jié)哺乳動物基因組DNA的提取(160)
第二節(jié)植物基因組DNA的提取(162)
第三節(jié)植物總RNA的提取與電泳(165)
第四節(jié)酵母RNA的分離與組分鑒定(167)
第五節(jié)組織和細胞RNA的制備(170)
第六節(jié)核苷酸的紙電泳(172)
第七節(jié)紫外分光光度法測定核酸的含量(174)
第八節(jié)RNA與DNA的測定(176)
第九節(jié)DNA的瓊脂糖凝膠電泳(179)
第十節(jié)質(zhì)粒DNA的微量制備(堿裂解法、煮沸法)(182)
第十一節(jié)質(zhì)粒DNA的酶切鑒定及瓊脂糖凝膠電泳(187)
第十二節(jié)質(zhì)粒DNA的大量制備與純化(189)
第十三節(jié)大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備與轉(zhuǎn)化(193)
第十四節(jié)PCR基因擴增(198)
第九章綜合性與設(shè)計性實驗(200)
第一節(jié)雞卵類黏蛋白的分離純化(200)
第二節(jié)纖維素酶活性測定及pH值對其活性的影響(205)
第三節(jié)酪氨酸酶的提取及其催化活性研究(208)
第四節(jié)酵母蔗糖酶的純化及性質(zhì)研究(212)
Ⅰ酵母蔗糖酶的提取與純化(212)
Ⅱ蔗糖酶Km值測定及脲的抑制作用(213)
ⅢpH值對酶活性的影響和最適pH值的測定(217)
Ⅳ溫度對酶活性的影響和反應(yīng)活化能的測定(220)
第五節(jié)固定化酵母細胞及蔗糖酶活性的檢測(222)
第六節(jié)溫度、pH值、激活劑和抑制劑對唾液淀粉酶活性的影響(224)
第七節(jié)溶菌酶結(jié)晶的制備及活性測定(226)
第八節(jié)轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的PCR檢測(230)
第九節(jié)橘皮果膠的提取及果凍的制備(235)
第十節(jié)發(fā)酵過程中無機磷的利用和ATP的生成(236)
附錄實驗室中常用參數(shù)(239)
參考文獻(240)