第一章 動物實驗的基本操作
動物實驗是免疫學實驗中的一種基本實驗技術。動物實驗的基本操作包括實驗動物的抓取固定、標記編號、注射給藥、取血及處死方法等。
第一節(jié) 實驗動物的抓取固定
實驗動物的抓取固定方法依實驗內容和動物的種類而定。正確的抓取固定動物，既可防止被動物咬傷，又不損害動物健康，有利于實驗順利完成。抓取固定動物前，要了解各種動物的一般習性。抓取固定時，要小心仔細、大膽敏捷、熟練準確，同時要愛惜動物，使動物少受痛苦，不能粗暴恐嚇動物。
一、小鼠抓取固定
小鼠性情較溫順，一般不會咬人，比較容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其他粗糙表面上，在小鼠向前掙扎爬行時，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚，將小鼠置于左手掌心，無名指和小指夾其背部皮膚和尾部，即可將小鼠完全固定(圖1-1)。在一些特殊的實驗中，如進行尾靜脈注射時，可使用特殊的固定裝置進行固定，如尾靜脈注射架或粗的玻璃試管。如要進行手術或心臟采血應先行麻醉再操作，如進行解剖實驗則必須先行無痛處死后再進行實驗。
二、大鼠的抓取固定
大鼠比小鼠牙尖性猛，可帶上帆布手套抓取，避免被咬傷。進行灌胃，腹腔、肌肉及皮下注射時，可采用左手固定法：用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指緊捏鼠背皮膚，置于左掌心中，右手進行實驗操作；也可伸開左手之虎口，敏捷地從后面一把抓住(圖1-2)。做手術時，事先麻醉或處死，然后用細棉線繩活縛腿，背臥位綁在大鼠固定板上；尾靜脈注射時用大鼠固定盒固定即可。


三、豚鼠的抓取與固定
豚鼠膽小易驚，抓取必須穩(wěn)、準、迅速。一般先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，另一只手托住臀部(圖1-3)。
另一種抓取方法是：把左手的食指和中指放在頸背部的兩側，拇指和無名指放在肋部，分別用手指夾住左右前肢，抓起來。然后翻轉左手，用右手的拇指和食指夾住右后肢，用中指和無名指夾住左后肢，使鼠體伸直成一條直線。不能抓豚鼠腰腹部，否則易造成肝破裂。固定的方式基本同大鼠。
四、兔的抓取固定
一般以右手抓住兔頸部的毛皮提起，左手托其臀部或腹部，讓其大部分體重集中在左手上(圖1-4)，可避免動物的損傷。不能抓雙耳或抓提腹部。
家兔的固定一般分為盒式固定和臺式固定(圖1-5)。其中盒式固定適用于兔耳采血、耳血管注射等情況；臺式固定適用于手術時：動物仰臥，四肢用粗棉繩活結綁住，拉直四肢，將繩綁在兔臺四周的固定棒上，頭以固定夾固定或用一根粗棉繩挑過兔門齒綁在兔臺鐵 柱上。

圖1-5 家兔的盒式固定與臺式固定

第二節(jié) 動物實驗注射給藥法
一、腹 腔 注 射
腹腔注射部位為下腹部腹中線左右兩側1cm處，為避免傷及內臟，抓取固定動物時應使頭稍向后低，使內臟移向上腹(圖1-6)。局部消毒后，右手持注射器將針頭刺入皮膚，針頭到達皮下后，稍向前推，再以45°刺入腹腔，回抽無回血或液體方可注入藥液。腹腔注射通常均選取5號針頭。大鼠、小鼠、豚鼠腹腔注射時一般以左手固定動物，右手注射；對體重較大的大鼠或豚鼠、家兔等大動物，可由助手固定動物，暴露腹部，另一人進行注射操作。
二、皮 下 注 射
一般選擇皮下組織較疏松的部位注射。大鼠、小鼠、家兔、犬等注射部位有頸背、腋下、側腹和后肢，豬為耳根部皮下，雞為翼下部位。局部消毒，注射者將皮膚提起，將注射針頭刺入皺褶底部，沿體軸推進5~10mm，若針尖易左右擺動，表明已刺入皮下，回抽無回流物即可注射，皮下呈擴散狀隆起。注射完畢，干棉球局部壓迫，防注液外漏。小鼠用4號針頭，家兔等用6號針頭。
三、皮 內 注 射
大鼠、小鼠、豚鼠、家兔等動物皮內注射常選擇背部脊柱兩側的皮膚。豬選取耳殼外面或腹側皮膚注射。局部去毛、消毒，用左手將皮膚捏成皺襞，右手持針，將針頭與皮膚約成30°角刺入皮下，使針頭向上挑起并稍刺入，即可注射(圖1-7)，注射部位鼓起一小丘。




四、肌 內 注 射
大鼠、小鼠、家兔、犬等一般選擇肌肉豐滿而無大血管通過的臀部、大腿內外側肌內注射。局部消毒，使注射針與肌肉約成60°角，迅速刺入肌肉，回抽無回血方可進行注射(圖1-8)。大鼠和小鼠選用5號針頭，家兔、貓、犬選用6號針頭。
五、靜 脈 注 射
1. 大鼠、小鼠尾靜脈注射 大鼠、小鼠尾部有四根血管，其中腹側的一根為動脈，背部的一根為靜脈，兩側各有一根靜脈。兩側靜脈較易固定，用來靜脈注射。先固定，暴露尾部，使血管擴張，用左手無名指從下面托起尾巴，以拇指和小拇指夾住尾巴的末梢，右手持4號注射針，從尾末端沿與靜脈平行方向進針，針頭刺入后輕推藥液，若無阻力，表示針頭已在靜脈中，可繼續(xù)緩緩推入藥液；若輕推藥液后阻力較大，且有白色隆起，說明注射到皮下，需拔出針重新刺入。注射完畢用干棉球按壓止血或把尾巴向注射側彎曲以止血(圖1-9)。
2. 豚鼠背中足靜脈注射 固定動物，找到靜脈，局部剪毛，消毒(為方便注射甚至可剪破皮膚)，右手持4號注射針沿向心方向刺入血管，回抽有回血即可注射，注射后干棉球壓迫止血，膠布包裹傷口。
也可耳緣靜脈注射。耳緣靜脈較細注射難度大，固定很重要。操作者先使靜脈充盈，用左手食指和中指夾住靜脈近心端，拇指和小指夾住耳邊緣部分，無名指和小指在耳下作墊，右手持4號注射針從靜脈末端順血管平行方向刺入，回抽如有回血，放松對耳根部血管的壓迫，固定針頭緩慢注入藥液。
3. 家兔耳緣靜脈注射 將兔盒式固定，找到耳緣靜脈，拔去局部被毛，酒精擦拭使血管充盈。注射、止血方法與豚鼠基本相同。若注射成功，注射器針栓可輕松推動，可見藥液在血管內流動(圖1-10)。

圖1-9 小鼠尾靜脈注射 圖1-10 家兔耳緣靜脈注射


第三節(jié) 動物實驗的采血方法
一、小鼠和大鼠的采血方法
1. 割(剪)尾采血 固定，尾部用45~50℃的溫水或酒精擦拭，使尾靜脈充盈擴張。消毒，割去尾尖1~2mm (小鼠)或3~5mm(大鼠)，讓血液自由滴入試管或用血紅蛋白吸管吸取(圖1-11)。采血結束，傷口消毒，棉球壓迫止血�；蛟谖膊孔鲆粰M切口，割破尾動脈或靜脈收集血液。取血量少，小鼠0.1mL/次，大鼠0.3~0.5mL/次。每只鼠可采血10次 以上。
2. 尾靜脈穿刺采血 固定，充盈尾靜脈，消毒，注射針沿與靜脈平行方向，從尾末端進針穿刺，抽取血液。
3. 眼眶后靜脈叢采血 將取血管浸入1%肝素，干燥后使用。操作者一手固定動物，拇指和食指盡量將鼠頭部皮膚捏緊，或輕輕壓迫頸部兩側，使鼠眼球突出，眶后靜脈叢充血，另一只手持取血管，以45°角從內眼角刺入，深度為小鼠2~3mm，大鼠4~5mm。當感到有阻力時即停止推進，將針退出0.1~0.5mm，邊退邊抽。采血后，去頸部壓力，拔出采血管。可短期內重復采血，采血量小鼠為0.2~0.3mL/次，大鼠0.5~1.0mL/次。
4. 摘眼球法 左手固定動物，壓迫眼球，盡量使眼球突出，右手用鑷子或止血鉗在眼球根部迅速摘除眼球，眼眶內很快流出血液(圖1-12)。

圖1-12 小鼠摘眼球取血
5. 斷頭采血 采血者左手的拇指和食指從背部握住鼠的頸部皮膚，用剪刀迅速剪掉頭部，立即將頭朝下，提起動物，血液即流入試管中。采血量小鼠為0.8~1.2mL，大鼠5~10mL。
6. 頸(股)動靜脈采血 將鼠麻醉，剪去一側頸部外側被毛，做頸動靜脈分離手術，用注射器采血即可。


二、豚鼠采血法
1. 耳緣剪口采血 使耳充血，消毒，用銳器割破耳緣，切口邊緣涂抹20%枸櫞酸鈉，阻止血凝，血自切口自動流出進入盛器。每次采血約0.5mL。
2. 心臟采血 可由助手握住前后肢進行采血。選心臟搏動最強部位進針穿刺，血液即流入針管。針頭宜細長，以免術后穿刺孔出血。
3. 股動脈采血 固定，剪去腹股溝被毛，局部麻醉，切開長2~3cm的皮膚，鈍性分離軟組織，暴露并游離出1~2cm的股動脈。用鑷子提起股動脈，遠心端結扎，近心端用止血鉗夾住，在動脈壁中央剪一小孔，插入采血細管，放開止血鉗，血液即可流出。一次可采血10~20mL。
4. 背中足靜脈取血 助手固定動物，伸直膝關節(jié)。術者消毒腳背面，以左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手持注射針刺入靜脈取血，完畢后用棉球壓迫止血。
三、兔 采 血 法
1. 耳緣靜脈采血 固定，局部去毛，用手指摩擦兔耳，使靜脈擴張，消毒，在耳緣靜脈末端刺破血管待血液漏出取血，或將針頭逆血流方向刺入耳緣靜脈取血，完畢，用棉球壓迫止血，一次最多采血5~10mL，可反復取血。
2. 兔耳中央動脈采血 兔耳中央較粗、顏色鮮紅的為中央動脈。先使兔耳充血，左手固定兔耳，右手持6號針頭注射器從動脈末端沿與血管平行地向心方向刺入，即可見動脈血進入針筒，取血完畢后注意止血。一次約采血15mL。
3. 心臟取血 固定，剪去左胸部兔毛，消毒。在胸骨左緣第3、4肋骨間心尖搏動最強處垂直刺入心臟，血液可自動泵入注射器。若針頭已進入心臟但抽不出血時，可以前后進退調節(jié)針頭的位置，切不可使針頭在胸腔內左右擺動以防止傷及心、肺。一次可取血20~25mL，6~7天后可重復采血。也可用50mL注射器(16號針頭)心臟一次抽血致死。
4. 后肢脛部皮下靜脈取血 固定，拔去脛部被毛，在脛部上端股部扎橡皮管，在脛部外側淺表皮下可見到皮下靜脈。用左手拇指、食指固定好血管，右手持注射器(5號針頭)與靜脈平行進針，抽血有回血即可采血。采血完畢后用棉球壓迫止血，此處不易止血，壓迫時間應稍長。一次可采血2~5mL。
5. 大血管采血
(1) 頸外靜脈采血：將兔臺式固定，充分暴露頸部。用左手朝心端繃緊頸部皮膚，右手持注射器沿頸部平行方向朝頭端方向刺入，有回血后，固定好注射器，緩慢采血。一次可取血10mL以上。取血完畢，用干紗布壓迫止血。
(2) 股動脈、股靜脈采血：固定后，左手捫股三角區(qū)，觸及動脈搏動部位，盡量由遠心端進針，向近心端方向穿刺，刺中可見血液流入針筒。如采靜脈血，在捫到動脈搏動的部位進針后，當針頭觸及索狀感股動脈時，將針頭稍朝內側移動，再迅速穿刺，即可穿刺到股靜脈。采血完畢，用棉球壓迫止血。