本書根據(jù)作者講授課程講義編寫而成,包含12個實驗項目,如分子克隆、蛋白表達純化、酶活檢測、探針標記、質(zhì)譜鑒定以及生物成像等。
全書共12個實驗項目,包括質(zhì)粒提取與PCR擴增,質(zhì)粒轉(zhuǎn)化,蛋白質(zhì)熒光標記,酶活檢測,RNA提取與測定,F(xiàn)TO蛋白表達量檢測,細胞成像,過氧化物酶活性檢測,利用光交聯(lián)非天然氨基酸鑒定蛋白-蛋白互作(兩次實驗),基于活性的蛋白質(zhì)組分析(兩次實驗)。每個實驗由實驗?zāi)康摹嶒灡尘、實驗原理、實驗操作、思考題等五部分組成,條理清晰,內(nèi)容詳實,部分實驗后有附錄與參考文獻等擴展內(nèi)容。
本書適合作為高等院校化學及生物相關(guān)專業(yè)本科生教材。
北京大學化學與分子工程學院化學生物學實驗教學組
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本書由北京大學化學與分子工程學院化學生物學實驗教學組撰寫。負責人王初,化學學院教授,前沿交叉學院副院長,化學“101計劃”化學生物學實驗課程牽頭人;高珍,化學實驗教學中心教師,參與并編寫《化學實驗室安全只是教程》。
實驗一 質(zhì)粒提取、聚合酶鏈式反應(yīng)擴增及瓊脂糖凝膠電泳檢測
實驗二 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化和蛋白質(zhì)的純化
實驗三 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析和蛋白質(zhì)熒光標記
實驗四 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測m6A去甲基酶FTO體外酶活性
實驗五 細胞總RNA的提取、測定與基因表達量的檢測
實驗六 FTO蛋白表達量的蛋白質(zhì)免疫印記檢測
實驗七 基于點擊化學和免疫熒光的細胞成像
實驗八 過氧化物酶的酶活動力學
實驗九 利用光交聯(lián)非天然氨基酸鑒定蛋白-蛋白互作(一)——非天然氨基酸定點插入誘導的蛋白-蛋白共價交聯(lián)
實驗十 利用光交聯(lián)非天然氨基酸鑒定蛋白-蛋白互作(二)——膠內(nèi)酶切質(zhì)譜樣品的制備
實驗十一 基于活性的蛋白質(zhì)組分析(一)——探針標記及熒光凝膠成像
實驗十二 基于活性的蛋白質(zhì)組分析(二)——同位素標記蛋白質(zhì)組的定量分析
附錄1 常規(guī)儀器和耗材
附錄2 實驗試劑準備